Productes

Descripció:tanshinone I és un inhibidor de sPLA2 recombinant humà de tipus IIA i de cPLA2 recombinant de conill amb IC50 d'11 μM i 82 μM respectivament.

Categories relacionades:vies de senyalització >> enzims metabòlics /
proteases > > fosfolípids
Àmbit de recerca > > malalties cardiovasculars
Productes Naturals > > Quinones

Objectiu:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

Estudi in vitro:tanshinona I va inhibir la formació de PGE2 per macròfags crus induïts per LPS (IC50 = 38 μ M）。 Quan es van afegir tanshinona I i LPS al mateix temps, el compost va inhibir significativament la producció de M de 10-100 μ PGE2 (IC50 = 38 μ M). ）。 Quan s'afegeix després de la inducció completa de COX-2, la tanshinona I també va reduir la producció de PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 El fet que la tanshinona I inhibeix la producció de PGE 2 mitjançant la COX-2 pre-induïda suggereix fortament que el compost pot inhibeix directament l'activitat de COX-2 i/o afecta l'activitat de PLA2 Quan la tanshinona I es va incubar amb dues formes diferents de fosfolipasa A2 (PLA2), va inhibir significativament l'sPLA2 de manera dependent de la concentració (IC50 = 11) μ M). potència, tanshinona I també va inhibir cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Estudi in vivo:tanshinone I va mostrar activitat antiinflamatòria en edema de pota induït per carragenina i artritis induïda adjuvant a rates.Per tal d'establir l'activitat antiinflamatòria de la tanshinona I, es van utilitzar models animals clàssics d'inflamació aguda i crònica [carragenina de rata (CGN) - edema de pota induït i artritis induïda per adjuvant de rata (AIA)].Quan la tanshinona I oral, va mostrar una activitat antiinflamatòria significativa contra l'edema de pota induït per CGN (47% d'inhibició a 160 mg / kg), mentre que la IC50 de la indometacina era de 7,1 mg / kg.A l'AIA, la tanshinona I va donar un 27% d'inhibició de la inflamació secundària el dia 18 a una dosi oral de 50 mg / kg / dia, mentre que la prednisolona (5 mg / kg / dia) va mostrar una inhibició efectiva (65%) [1]

Experiment de quinasa:com a font de PLA2, es va purificar sPLA2 recombinant humà (tipus IIA) a partir de cèl·lules CHO transfectades amb el gen PLA2 i es va obtenir cPLA2 recombinant de plaquetes de conill mitjançant la seva expressió en baculovirus.Mescla de reacció estàndard (200) μ 50) Contenia 100 mm de tampó Tris HCl (pH 9,0), 6 mM de CaCl2 i 20 nmol d'1-acil - [1-14C] - araquidonil Sn glicerol fosfat etanolamina (2000 CPM / nmol).O no hi havia tanshinona I. la reacció es va iniciar afegint 50 NG de sPLA2 o cPLA2 purificats.Després de 20 minuts a 37 ℃, es van analitzar els àcids grassos lliures produïts.En aquestes condicions estàndard, al voltant del 10% dels àcids grassos lliures s'alliberen del substrat fosfolípid afegit a la barreja de reacció sense tanshinona I [1].

Experiment amb cèl·lules:264,7 cèl·lules en brut es van cultivar amb DMEM suplementat amb un 10% de FBS i un 1% d'antibiòtics a 37 ℃ amb un 5% de CO2.En resum, les cèl·lules es van sembrar en plaques de 96 pous (2) × 10 (5 cèl·lules / pou).Llevat que s'indiqui el contrari, es van afegir LPS (1 ug / ml) i tanshinona I i es van incubar durant 24 hores.La concentració de PGE2 al medi es va mesurar mitjançant el kit EIA per a PGE2.Per tal de determinar l'efecte de la tanshinona I sobre la producció de PGE 2 després de la inducció de COX-2, les cèl·lules es van barrejar amb LPS (1 μ G / ml) durant 24 hores i es van rentar a fons.A continuació, es va afegir tanshinona I sense LPS i les cèl·lules es van cultivar durant 24 hores més.La concentració de PGE2 es va mesurar a partir del medi.El test MTT es va utilitzar per examinar la citotoxicitat de la tanshinona I a les cèl·lules crues.Tanshinone I a 100 μ M no va mostrar cap citotoxicitat [1].

Experiment amb animals:per avaluar l'activitat inhibidora de la tanshinona I en models animals inflamatoris aguts i crònics, es van utilitzar models d'edema de pota induït per carragenina de rata (CGN) i models d'artritis induïda adjuvant (AIA).En resum, es va injectar un 1% de CGN dissolt en solució salina lliure de pirogen (0, 05 ml) a la pota posterior dreta de les rates per a la prova d'edema de la pota.Després de 5 hores, es va mesurar la inflamació de les urpes tractades mitjançant un pletismògraf.Tanshinone I dissolt en CMC al 0,5% es va administrar per via oral 1 hora abans de la injecció de CGN.Per a la prova AIA, la inflamació artrítica es va induir injectant Mycobacterium lactis (0,6 ml / rata) dissolt en oli mineral a la pota posterior dreta de les rates.Tanshinone em van administrar per via oral cada dia.L'expansió de les urpes tractades i no tractades es va mesurar mitjançant un pletismògraf.

Referències:[1] Kim SY, et al.Efectes de Tanshinone I aïllat de Salvia miltiorrhiza bunge sobre el metabolisme de l'àcid araquidònic i les respostes inflamatòries in vivo.Phytother Res.2002 novembre;16(7):616-20.