produkty

Popis:tanshinon I je lidský rekombinantní inhibitor sPLA2 a králičí rekombinantní cPLA2 typu IIA s IC50 11 μM a 82 μM.

Související kategorie:signální dráhy > > metabolické enzymy /
proteázy > > fosfolipidy
Oblast výzkumu >> kardiovaskulární onemocnění
Přírodní produkty > > Chinony

Cílová:IC50: 11 uM (sPLA2), 82 uM (cPLA2)[1].

Studie in vitro:tanshinon I inhiboval tvorbu PGE2 surovými makrofágy indukovanými LPS (IC50 = 38 μM）。 Když byly tanshinon I a LPS přidány současně, sloučenina významně inhibovala 10–100 μ PGE2 produkci M (IC50 = 38 μM ）。 Když se tanshinon I přidá po úplné indukci COX-2, snižuje také produkci PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Skutečnost, že tanshinon I inhibuje produkci PGE 2 prostřednictvím předem indukované COX-2, silně naznačuje, že sloučenina může přímo inhibují aktivitu COX-2 a/nebo ovlivňují aktivitu PLA2. Když byl tanshinon I inkubován se dvěma různými formami fosfolipázy A2 (PLA2), významně inhiboval sPLA2 způsobem závislým na koncentraci (IC50 = 11) μM. účinnost, tanshinon I také inhiboval cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Studie in vivo:tanshinon I vykazoval protizánětlivou aktivitu u edému tlapky vyvolaného karagenanem a artritidě vyvolané adjuvans u potkanů.Aby se stanovila protizánětlivá aktivita tanshinonu I, byly použity klasické zvířecí modely akutního a chronického zánětu [krysí karagenanem (CGN) - indukovaný edém tlapky a krysí adjuvans indukovaná artritida (AIA)].Při orálním podání tanshinonu I vykazoval významnou protizánětlivou aktivitu proti otoku tlapky vyvolanému CGN (47% inhibice při 160 mg/kg), zatímco IC50 indomethacinu byla 7,1 mg/kg.U AIA tanshinon I poskytl 27% inhibici sekundárního zánětu 18. den při perorální dávce 50 mg/kg/den, zatímco prednisolon (5 mg/kg/den) vykazoval účinnou inhibici (65 %) [1]

Experiment s kinázou:jako zdroj PLA2 byla purifikována lidská rekombinantní sPLA2 (typ IIA) z buněk CHO transfekovaných genem PLA2 a králičí rekombinantní krevní destička cPLA2 byla získána její expresí v bakuloviru.Standardní reakční směs (200) μ 50) Obsahovala 100 mm Tris HCl pufru (pH 9,0), 6 mM CaCl2 a 20 nmol 1-acyl - [1-14C] - arachidonyl Sn glycerol fosfát ethanolaminu (2000 CPM / nmol).Nebo nebyl žádný tanshinon I. reakce byla zahájena přidáním 50 NG purifikovaného sPLA2 nebo cPLA2.Po 20 minutách při 37 °C byly analyzovány produkované volné mastné kyseliny.Za těchto standardních podmínek se z přidaného fosfolipidového substrátu v reakční směsi bez tanshinonu I uvolní asi 10 % volných mastných kyselin [1].

Buněčný experiment:surové buňky 264.7 byly kultivovány s DMEM doplněným 10 % FBS a 1 % antibiotiky při 37 °C pod 5 % CO2.Stručně řečeno, buňky byly nasazeny na 96jamkové destičky (2) x 10 (5 buněk/jamka).Pokud není uvedeno jinak, byly přidány LPS (1 ug/ml) a tanshinon I a inkubovány po dobu 24 hodin.Koncentrace PGE2 v médiu byla měřena pomocí soupravy EIA pro PGE2.Za účelem stanovení účinku tanshinonu I na produkci PGE 2 po indukci COX-2 byly buňky smíchány s LPS (1 μG / ml) po dobu 24 hodin a důkladně promyty.Poté byl přidán tanshinon I bez LPS a buňky byly kultivovány dalších 24 hodin.Koncentrace PGE2 byla měřena z média.MTT test byl použit ke zkoumání cytotoxicity tanshinonu I na surových buňkách.Tanshinon I při 100 μM nevykazoval žádnou cytotoxicitu [1].

Pokus na zvířatech:za účelem vyhodnocení inhibiční aktivity tanshinonu I na zvířecích modelech akutního a chronického zánětu byly použity modely krysího karagenanu (CGN) - indukovaného edému tlapky a artritidy indukované adjuvans (AIA).Stručně řečeno, 1% CGN rozpuštěný v apyrogenním fyziologickém roztoku (0,05 ml) byl injikován do pravé zadní tlapky krys pro test edému tlapky.Po 5 hodinách se změřilo otoky ošetřených drápů pomocí pletysmografu.Tanshinon I rozpuštěný v 0,5% CMC byl podáván orálně 1 hodinu před injekcí CGN.Pro test AIA byl artritický zánět indukován injekcí Mycobacterium lactis (0,6 ml/krysa) rozpuštěného v minerálním oleji do pravé zadní tlapky krys.Tanshinone I byl podáván perorálně každý den.Expanze ošetřených a neošetřených drápů byla měřena pomocí pletysmografu.

Reference:[1] Kim SY, a kol.Účinky Tanshinonu I izolovaného ze Salvia miltiorrhiza bunge na metabolismus kyseliny arachidonové a in vivo zánětlivé reakce.Phytother Res.listopad 2002;16(7):616-20.