Produkter

Beskrivelse:tanshinon I er en type IIA human rekombinant sPLA2 og kanin rekombinant cPLA2 hæmmer med IC50 på henholdsvis 11 μM og 82 μM.

Relaterede kategorier:signalveje > > metaboliske enzymer /
proteaser > > fosfolipider
Forskningsområde >> hjerte-kar-sygdomme
Naturlige produkter > > Quinoner

Mål:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

In vitro undersøgelse:tanshinon I hæmmede dannelsen af ​​PGE2 af LPS-inducerede rå makrofager (IC50 = 38 μM）。 Når tanshinon I og LPS blev tilsat på samme tid, hæmmede forbindelsen signifikant 10-100 μ PGE2-produktion af M (IC50 = 38 μM) ）。 Ved tilsætning efter fuldstændig induktion af COX-2 reducerede tanshinon I også produktionen af ​​PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Det faktum, at tanshinon I hæmmer PGE 2-produktion gennem præ-induceret COX-2, tyder stærkt på, at forbindelsen kan direkte hæmmer COX-2-aktivitet og/eller påvirker PLA2-aktivitet. Når tanshinon I blev inkuberet med to forskellige former for phospholipase A2 (PLA2), hæmmede det sPLA2 signifikant på en koncentrationsafhængig måde (IC50 = 11) μM). På trods af dets lave styrke, tanshinon I hæmmede også cPLA2 (IC50 = 82) μM）[1]

In vivo undersøgelse:tanshinon I viste anti-inflammatorisk aktivitet i carrageenan-induceret poteødem og adjuvans-induceret arthritis hos rotter.For at fastslå den anti-inflammatoriske aktivitet af tanshinon I blev der brugt klassiske dyremodeller af akut og kronisk inflammation [rottecarrageenan (CGN)-induceret poteødem og rotteadjuvans-induceret arthritis (AIA)].Ved oral tanshinon I viste det signifikant anti-inflammatorisk aktivitet mod CGN-induceret poteødem (47 % hæmning ved 160 mg/kg), mens IC50 for indomethacin var 7,1 mg/kg.Ved AIA gav tanshinon I 27% hæmning af sekundær inflammation på dag 18 ved en oral dosis på 50 mg/kg/dag, mens prednisolon (5 mg/kg/dag) viste effektiv hæmning (65%) [1]

Kinase eksperiment:som kilde til PLA2 blev human rekombinant sPLA2 (type IIA) oprenset fra CHO-celler transficeret med PLA2-gen, og kanin-rekombinant blodplade-cPLA2 blev opnået gennem dets ekspression i baculovirus.Standard reaktionsblanding (200) μ 50) Den indeholdt 100 mm Tris HCl buffer (pH 9,0), 6 mM CaCl2 og 20 nmol 1-acyl - [1-14C] - arachidonyl Sn glycerol phosphat ethanolamin (2000 CPM / nmol).Eller der var ingen tanshinon I. reaktionen blev startet ved at tilsætte 50 NG oprenset sPLA2 eller cPLA2.Efter 20 minutter ved 37 ℃ blev de producerede frie fedtsyrer analyseret.Under disse standardbetingelser frigives omkring 10 % af de frie fedtsyrer fra det tilsatte phospholipidsubstrat i reaktionsblandingen uden tanshinon I [1].

Celleeksperiment:rå 264,7 celler blev dyrket med DMEM suppleret med 10 % FBS og 1 % antibiotika ved 37 ℃ under 5 % CO2.Kort sagt blev celler podet på plader med 96 brønde (2) × 10 (5 celler/brønd).Medmindre andet er angivet, blev LPS (1 ug/ml) og tanshinon I tilsat og inkuberet i 24 timer.PGE2-koncentrationen i mediet blev målt under anvendelse af EIA-kittet til PGE2.For at bestemme effekten af ​​tanshinon I på PGE 2-produktion efter COX-2-induktion blev celler blandet med LPS (1 μG/ml) i 24 timer og vasket grundigt.Derefter blev tanshinon I tilsat uden LPS, og cellerne blev dyrket i yderligere 24 timer.PGE2-koncentrationen blev målt fra mediet.MTT-assay blev brugt til at undersøge cytotoksiciteten af ​​tanshinon I på rå celler.Tanshinon I ved 100 μM viste ingen cytotoksicitet [1].

Dyreforsøg:For at evaluere den inhiberende aktivitet af tanshinon I på akutte og kroniske inflammatoriske dyremodeller blev der anvendt rottecarrageenan (CGN)-induceret poteødem og adjuvans-induceret arthritis (AIA) modeller.Kort sagt blev 1 % CGN opløst i pyrogenfrit saltvand (0,05 ml) injiceret i den højre bagpote på rotter til poteødemtest.Efter 5 timer blev hævelsen af ​​de behandlede kløer målt ved anvendelse af en plethysmograf.Tanshinon I opløst i 0,5 % CMC blev administreret oralt 1 time før CGN-injektion.Til AIA-testen blev arthritisk inflammation induceret ved at injicere Mycobacterium lactis (0,6 ml/rotte) opløst i mineralolie i højre bagpote på rotter.Tanshinone Jeg fik oralt hver dag.Udvidelsen af ​​behandlede og ubehandlede kløer blev målt ved hjælp af en plethysmograf.

Referencer:[1] Kim SY, et al.Virkninger af Tanshinone I isoleret fra Salvia miltiorrhiza bunge på arachidonsyremetabolisme og in vivo inflammatoriske reaktioner.Phytother Res.2002 Nov;16(7):616-20.