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Descripción:tanshinone I es un inhibidor de sPLA2 recombinante humano de tipo IIA y cPLA2 recombinante de conejo con IC50 de 11 μ M y 82 μ M respectivamente.

Categorias relacionadas:vías de señalización > > enzimas metabólicas /
proteasas > > fosfolípidos
Campo de investigación > > enfermedad cardiovascular
Productos Naturales > > Quinonas

Objetivo:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

Estudio in vitro:tanshinone I inhibió la formación de PGE2 por macrófagos crudos inducidos por LPS (IC50 = 38 μ M）。 Cuando se agregaron tanshinone I y LPS al mismo tiempo, el compuesto inhibió significativamente 10-100 μ PGE2 producción de M (IC50 = 38 μ M ）。 Cuando se agregó después de la inducción completa de COX-2, la tanshinona I también redujo la producción de PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 El hecho de que la tanshinona I inhiba la producción de PGE 2 a través de la COX-2 preinducida sugiere fuertemente que el compuesto puede inhiben directamente la actividad de la COX-2 y/o afectan la actividad de PLA2. Cuando la tanshinona I se incubó con dos formas diferentes de fosfolipasa A2 (PLA2), inhibió significativamente la sPLA2 de manera dependiente de la concentración (IC50 = 11) μ M). potencia, tanshinone I también inhibió cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Estudio en Vivo:la tanshinona I mostró actividad antiinflamatoria en el edema de la pata inducido por carragenina y la artritis inducida por adyuvante en ratas.Para establecer la actividad antiinflamatoria de la tanshinona I, se utilizaron modelos animales clásicos de inflamación aguda y crónica [carragenina de rata (CGN) - edema de la pata inducido y artritis inducida por adyuvante de rata (AIA)].Cuando la tanshinona I oral, mostró una actividad antiinflamatoria significativa contra el edema de la pata inducido por CGN (47% de inhibición a 160 mg/kg), mientras que la IC50 de la indometacina fue de 7,1 mg/kg.En AIA, la tanshinona I dio una inhibición del 27 % de la inflamación secundaria el día 18 a una dosis oral de 50 mg/kg/día, mientras que la prednisolona (5 mg/kg/día) mostró una inhibición efectiva (65 %) [1]

Experimento de quinasa:como fuente de PLA2, se purificó sPLA2 humana recombinante (tipo IIA) a partir de células CHO transfectadas con el gen PLA2, y se obtuvo cPLA2 de plaquetas recombinantes de conejo a través de su expresión en baculovirus.Mezcla de reacción estándar (200) μ 50) Contenía tampón Tris HCl 100 mm (pH 9,0), CaCl2 6 mM y 20 nmol de 1-acil - [1-14C] - araquidonil Sn glicerol fosfato etanolamina (2000 CPM/nmol).O no había tanshinona I. La reacción se inició añadiendo 50 NG de sPLA2 o cPLA2 purificada.Después de 20 minutos a 37 ℃, se analizaron los ácidos grasos libres producidos.Bajo estas condiciones estándar, alrededor del 10% de los ácidos grasos libres se liberan del sustrato de fosfolípidos agregado en la mezcla de reacción sin tanshinone I [1].

Experimento celular:Las células 264.7 sin procesar se cultivaron con DMEM complementado con FBS al 10 % y antibióticos al 1 % a 37 ℃ con CO2 al 5 %.En resumen, las células se sembraron en placas de 96 pocillos (2) × 10 (5 células/pocillo).A menos que se indique lo contrario, se añadieron LPS (1 ug/ml) y tanshinone I y se incubaron durante 24 horas.La concentración de PGE2 en el medio se midió usando el kit EIA para PGE2.Para determinar el efecto de la tanshinona I sobre la producción de PGE 2 después de la inducción de COX-2, las células se mezclaron con LPS (1 μ G/ml) durante 24 horas y se lavaron minuciosamente.Luego, se añadió tanshinone I sin LPS y las células se cultivaron durante otras 24 horas.La concentración de PGE2 se midió a partir del medio.Se usó el ensayo MTT para examinar la citotoxicidad de la tanshinona I en células crudas.Tanshinone I a 100 μ M no mostró ninguna citotoxicidad [1].

Experimento con animales:Con el fin de evaluar la actividad inhibitoria de la tanshinona I en modelos animales de inflamación aguda y crónica, se utilizaron modelos de edema de la pata inducido por carragenina (CGN) en rata y modelos de artritis inducida por adyuvante (AIA).En resumen, se inyectó CGN al 1% disuelto en solución salina libre de pirógenos (0,05 ml) en la pata trasera derecha de ratas para la prueba de edema de la pata.Después de 5 horas, se midió el hinchamiento de las garras tratadas utilizando un pletismógrafo.La tanshinona I disuelta en CMC al 0,5% se administró por vía oral 1 hora antes de la inyección de CGN.Para la prueba AIA, se indujo inflamación artrítica inyectando Mycobacterium lactis (0,6 ml/rata) disuelto en aceite mineral en la pata trasera derecha de ratas.Tanshinone I se administró por vía oral todos los días.La expansión de las garras tratadas y no tratadas se midió utilizando un pletismógrafo.

Referencias:[1] Kim SY, et al.Efectos de la tanshinona I aislada de Salvia miltiorrhiza bunge sobre el metabolismo del ácido araquidónico y las respuestas inflamatorias in vivo.Phytother Res.noviembre de 2002;16(7):616-20.