Tooted

Kirjeldus:tanshinone I on IIA tüüpi inimese rekombinantne sPLA2 ja küüliku rekombinantne cPLA2 inhibiitor, mille IC50 on vastavalt 11 μM ja 82 μM.

Seotud kategooriad:signaalirajad > > metaboolsed ensüümid /
proteaasid > > fosfolipiidid
Uurimisvaldkond > > südame-veresoonkonna haigused
Looduslikud tooted >> Kinoonid

Sihtmärk:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

In vitro uuring:tanshinoon I inhibeeris PGE2 moodustumist LPS-i indutseeritud toormakrofaagide poolt (IC50 = 38 μM）。 Tanšinoon I ja LPS samaaegsel lisamisel inhibeeris ühend oluliselt M 10-100 μ PGE2 tootmist (IC50 = 38 μM). ）。 Pärast COX-2 täielikku indutseerimist lisamisel vähendas tanshinoon I ka PGE2 tootmist (IC50 = 46) μM）。 Asjaolu, et tanshinoon I pärsib PGE 2 tootmist eelindutseeritud COX-2 kaudu, viitab kindlalt sellele, et ühend võib inhibeerib otseselt COX-2 aktiivsust ja/või mõjutab PLA2 aktiivsust. Kui tanshinoon I inkubeeriti kahe erineva fosfolipaasi A2 (PLA2) vormiga, inhibeeris see oluliselt sPLA2 kontsentratsioonist sõltuval viisil (IC50 = 11) μM. Vaatamata selle madalale tasemele tugevus, tanshinoon I inhibeeris ka cPLA2 (IC50 = 82) μM）[1]

In vivo uuring:tanshinone I näitas põletikuvastast toimet karrageenist põhjustatud käpa turse ja adjuvandist põhjustatud artriidi korral rottidel.Tanshinone I põletikuvastase toime kindlakstegemiseks kasutati ägeda ja kroonilise põletiku klassikalisi loommudeleid [roti karrageen (CGN) - indutseeritud käpa turse ja roti adjuvandist põhjustatud artriit (AIA)].Tanshinoon I suukaudsel manustamisel näitas see olulist põletikuvastast toimet CGN-st põhjustatud käpa turse vastu (47% inhibeerimine annuses 160 mg / kg), samas kui indometatsiini IC50 oli 7,1 mg / kg.AIA korral inhibeeris tanshinoon I 27% sekundaarset põletikku 18. päeval suukaudse annusega 50 mg / kg / päevas, samas kui prednisoloon (5 mg / kg / päevas) näitas tõhusat inhibeerimist (65%) [1]

Kinaasi katse:PLA2 allikana puhastati inimese rekombinantne sPLA2 (tüüp IIA) PLA2 geeniga transfekteeritud CHO rakkudest ja küüliku rekombinantne trombotsüütide cPLA2 saadi selle ekspressiooni kaudu bakuloviiruses.Standardne reaktsioonisegu (200) μ 50) See sisaldas 100 mm Tris HCl puhvrit (pH 9,0), 6 mM CaCl2 ja 20 nmol 1-atsüül-[1-14C]-arahhidonüül-Sn-glütseroolfosfaat-etanoolamiini (2000 CPM / /).Või puudus tanshinoon I. reaktsioon käivitati 50 NG puhastatud sPLA2 või cPLA2 lisamisega.Pärast 20 minutit 37 ℃ juures analüüsiti tekkinud vabu rasvhappeid.Nendes standardtingimustes vabaneb lisatud fosfolipiidsubstraadist reaktsioonisegus ilma tanshinooni Ita umbes 10% vabadest rasvhapetest [1].

Rakukatse:toores 264.7 rakke kultiveeriti DMEM-iga, millele oli lisatud 10% FBS-i ja 1% antibiootikume, temperatuuril 37 ℃ 5% CO2 atmosfääris.Lühidalt öeldes külvati rakud 96 süvendiga plaatidele (2) × 10 (5 rakku süvendi kohta).Kui pole teisiti näidatud, lisati LPS (1 ug/ml) ja tanshinoon I ning inkubeeriti 24 tundi.PGE2 kontsentratsioon söötmes mõõdeti, kasutades PGE2 jaoks mõeldud EIA komplekti.Selleks, et määrata tanshinoon I mõju PGE2 tootmisele pärast COX-2 induktsiooni, segati rakke 24 tundi LPS-ga (1 μG / ml) ja pesti põhjalikult.Seejärel lisati tanshinoon I ilma LPS-ita ja rakke kultiveeriti veel 24 tundi.PGE2 kontsentratsiooni mõõdeti söötmest.Tanshinoon I tsütotoksilisuse uurimiseks toorrakkudel kasutati MTT testi.Tanshinone I kontsentratsioonil 100 μM ei näidanud tsütotoksilisust [1].

Loomkatse:Tanšinoon I inhibeeriva toime hindamiseks ägeda ja kroonilise põletikulise loommudeli korral kasutati roti karrageeni (CGN) indutseeritud käpa turse ja adjuvandist põhjustatud artriidi (AIA) mudeleid.Lühidalt, pürogeenivabas soolalahuses (0,05 ml) lahustatud 1% CGN süstiti käpa turse testimiseks rottide paremasse tagumisse käppa.5 tunni pärast mõõdeti pletüsmograafi abil töödeldud küüniste turset.0,5% CMC-s lahustatud tanshinone I manustati suu kaudu 1 tund enne CGN süstimist.AIA testi jaoks kutsuti esile artriitiline põletik mineraalõlis lahustatud Mycobacterium lactis'e (0,6 ml roti kohta) süstimisega rottide paremasse tagakäppa.Tanshinone'i manustati mulle suukaudselt iga päev.Töödeldud ja töötlemata küüniste laienemist mõõdeti pletüsmograafi abil.

Viited:[1] Kim SY et al.Salvia miltiorrhiza bunge'ist eraldatud Tanshinone I mõju arahhidoonhappe metabolismile ja in vivo põletikulistele reaktsioonidele.Phytother Res.2002 nov;16(7):616-20.