Produtos

Descrición:A tanshinona I é un inhibidor de sPLA2 recombinante humano de tipo IIA e un inhibidor de cPLA2 recombinante de coello con IC50 de 11 μM e 82 μM respectivamente.

Categorías relacionadas:vías de sinalización > > encimas metabólicas /
proteases > > fosfolípidos
Ámbito de investigación > > enfermidades cardiovasculares
Produtos naturais > > Quinones

Obxectivo:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

Estudo in vitro:tanshinona I inhibiu a formación de PGE2 por macrófagos en bruto inducidos por LPS (IC50 = 38 μ M）。 Cando se engadiron tanshinona I e LPS ao mesmo tempo, o composto inhibiu significativamente a produción de M PGE2 de 10-100 μ (IC50 = 38 μ M). ）。 Cando se engade despois da indución completa de COX-2, a tanshinona I tamén reduciu a produción de PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 O feito de que a tanshinona I inhiba a produción de PGE 2 a través da COX-2 preinducida suxire fortemente que o composto pode inhiben directamente a actividade da COX-2 e/ou afectan á actividade da PLA2. Cando se incubou a tanshinona I con dúas formas diferentes de fosfolipase A2 (PLA2), inhibiu significativamente a sPLA2 de forma dependente da concentración (IC50 = 11) μ M). potencia, a tanshinona I tamén inhibiu cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Estudo in vivo:A tanshinona I mostrou actividade antiinflamatoria en edema de pata inducido por carragenina e artrite inducida por adyuvante en ratas.Para establecer a actividade antiinflamatoria da tanshinona I, utilizáronse modelos animais clásicos de inflamación aguda e crónica [carragenano de rata (CGN) - edema de pata inducido e artrite inducida por adyuvante de rata (AIA)].Cando a tanshinona I oral, mostrou unha actividade antiinflamatoria significativa contra o edema da pata inducido por CGN (inhibición do 47% a 160 mg / kg), mentres que a IC50 da indometacina foi de 7,1 mg / kg.En AIA, a tanshinona I deu un 27% de inhibición da inflamación secundaria o día 18 cunha dose oral de 50 mg/kg/día, mentres que a prednisolona (5 mg/kg/día) mostrou unha inhibición efectiva (65%) [1]

Experimento de quinase:como fonte de PLA2, purificouse a sPLA2 recombinante humana (tipo IIA) a partir de células CHO transfectadas co xene PLA2 e obtívose cPLA2 recombinante de plaquetas de coello mediante a súa expresión en baculovirus.Mestura de reacción estándar (200) μ 50) Contiña 100 mm de tampón Tris HCl (pH 9,0), 6 mM de CaCl2 e 20 nmol de 1-acil - [1-14C] - araquidonil Sn glicerol fosfato etanolamina (2000 CPM/nmol).Ou non había tanshinona I. a reacción comezouse engadindo 50NG de sPLA2 ou cPLA2 purificado.Despois de 20 minutos a 37 ℃, analizáronse os ácidos graxos libres producidos.Nestas condicións estándar, preto do 10% dos ácidos graxos libres son liberados do substrato fosfolípido engadido na mestura de reacción sen tanshinona I [1].

Experimento celular:Cultiváronse 264,7 células en bruto con DMEM complementado cun 10% de FBS e un 1% de antibióticos a 37 ℃ baixo un 5% de CO2.En resumo, as células sementáronse en placas de 96 pozos (2) × 10 (5 células/pozo).A menos que se indique o contrario, engadíronse LPS (1 ug/ml) e tanshinona I e incubáronse durante 24 horas.A concentración de PGE2 no medio foi medida mediante o kit EIA para PGE2.Para determinar o efecto da tanshinona I na produción de PGE 2 despois da indución da COX-2, as células mesturáronse con LPS (1 μ G / ml) durante 24 horas e laváronse ben.Despois, engadiuse tanshinona I sen LPS e as células cultiváronse durante outras 24 horas.A concentración de PGE2 foi medida a partir do medio.Utilizouse o ensaio MTT para examinar a citotoxicidade da tanshinona I en células brutas.Tanshinone I a 100 μM non mostrou ningunha citotoxicidade [1].

Experimento con animais:para avaliar a actividade inhibitoria da tanshinona I en modelos animais inflamatorios agudos e crónicos, empregáronse modelos de edema de pata inducido por carragenina de rata (CGN) e artrite inducida por adyuvante (AIA).En resumo, inxectouse un 1% de CGN disolto en solución salina libre de piróxenos (0,05 ml) na pata traseira dereita das ratas para a proba de edema da pata.Despois de 5 horas, mediuse o inchazo das garras tratadas mediante un pletismógrafo.Tanshinone I disolto nun 0,5% de CMC administrouse por vía oral 1 hora antes da inxección de CGN.Para a proba AIA, a inflamación artrítica foi inducida inxectando Mycobacterium lactis (0,6 ml/rata) disolto en aceite mineral na pata traseira dereita das ratas.Tanshinone administráronme por vía oral todos os días.Mediuse a expansión das garras tratadas e non tratadas mediante un pletismógrafo.

Referencias:[1] Kim SY, et al.Efectos de Tanshinone I illado do bunge de Salvia miltiorrhiza sobre o metabolismo do ácido araquidónico e as respostas inflamatorias in vivo.Phytother Res.2002 novembro;16(7):616-20.