Proizvodi

Opis:tanshinone I je tip IIA ljudski rekombinantni sPLA2 i zečji rekombinantni cPLA2 inhibitor s IC50 od 11 μM odnosno 82 μM.

Povezane kategorije:signalni putevi > > metabolički enzimi /
proteaze > > fosfolipidi
Područje istraživanja > > kardiovaskularne bolesti
Prirodni proizvodi > > Kinoni

Cilj:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

In vitro studija:tanshinone I inhibirao je stvaranje PGE2 sirovim makrofagima izazvanim LPS-om (IC50 = 38 μM）。 Kada su tanshinone I i LPS dodani u isto vrijeme, spoj je značajno inhibirao 10-100 μ PGE2 proizvodnju M (IC50 = 38 μM ）。 Kada se doda nakon potpune indukcije COX-2, tanshinone I također smanjuje proizvodnju PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Činjenica da tanshinone I inhibira proizvodnju PGE 2 putem unaprijed induciranog COX-2 snažno sugerira da spoj može izravno inhibiraju aktivnost COX-2 i/ili utječu na aktivnost PLA2. Kada je tanshinone I inkubiran s dva različita oblika fosfolipaze A2 (PLA2), značajno je inhibirao sPLA2 na način ovisan o koncentraciji (IC50 = 11) μM). Unatoč niskom potencije, tanshinone I također je inhibirao cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Studija in vivo:tanshinone I pokazao je protuupalnu aktivnost kod edema šape izazvanog karagenanom i artritisa izazvanog adjuvansom kod štakora.Kako bi se utvrdilo protuupalno djelovanje tanshinona I, korišteni su klasični životinjski modeli akutne i kronične upale [štakorski karagenanom (CGN) - inducirani edem šape i štakorski adjuvans induciran artritis (AIA)].Kada se tanšinon I oralno primijeni, pokazao je značajno protuupalno djelovanje protiv edema šape izazvanog CGN-om (47% inhibicije pri 160 mg/kg), dok je IC50 indometacina bio 7,1 mg/kg.U AIA, tanshinone I dao je 27% inhibicije sekundarne upale 18. dana pri oralnoj dozi od 50 mg/kg/dan, dok je prednizolon (5 mg/kg/dan) pokazao učinkovitu inhibiciju (65%) [1]

Eksperiment s kinazom:kao izvor PLA2, ljudski rekombinantni sPLA2 (tip IIA) je pročišćen iz CHO stanica transficiranih PLA2 genom, a zečji rekombinantni trombocitni cPLA2 je dobiven njegovom ekspresijom u bakulovirusu.Standardna reakcijska smjesa (200) μ 50) Sadržala je 100 mm Tris HCl pufer (pH 9,0), 6 mM CaCl2 i 20 nmol 1-acil - [1-14C] - arahidonil Sn glicerol fosfat etanolamina (2000 CPM / nmol).Ili nije bilo tanšinona I. reakcija je započeta dodavanjem 50NG pročišćenog sPLA2 ili cPLA2.Nakon 20 minuta na 37 ℃, analizirane su proizvedene slobodne masne kiseline.Pod ovim standardnim uvjetima, oko 10% slobodnih masnih kiselina oslobađa se iz dodanog fosfolipidnog supstrata u reakcijsku smjesu bez tanšinona I [1].

Stanični eksperiment:neobrađene 264.7 stanice uzgajane su s DMEM-om s dodatkom 10% FBS-a i 1% antibiotika na 37 ℃ pod 5% CO2.Ukratko, stanice su nasađene na ploče s 96 jažica (2) × 10 (5 stanica po jažici).Osim ako nije drugačije navedeno, dodani su LPS (1 ug/ml) i tanšinon I i inkubirani 24 sata.Koncentracija PGE2 u mediju mjerena je korištenjem EIA kompleta za PGE2.Kako bi se odredio učinak tanšinona I na proizvodnju PGE 2 nakon indukcije COX-2, stanice su miješane s LPS-om (1 μG/ml) 24 sata i temeljito isprane.Zatim je dodan tanshinone I bez LPS-a i stanice su uzgajane još 24 sata.Koncentracija PGE2 je mjerena iz medija.MTT test korišten je za ispitivanje citotoksičnosti tanšinona I na sirovim stanicama.Tanshinone I pri 100 µM nije pokazao nikakvu citotoksičnost [1].

Eksperiment na životinjama:kako bi se procijenila inhibicijska aktivnost tanšinona I na akutnim i kroničnim upalnim životinjskim modelima, korišteni su modeli edema šape induciranog karagenanom (CGN) i artritisa induciranog adjuvansom (AIA).Ukratko, 1% CGN otopljen u fiziološkoj otopini bez pirogena (0,05 ml) ubrizgan je u desnu stražnju šapu štakora za test edema šape.Nakon 5 sati, pletizmografom je izmjereno oticanje tretiranih kandži.Tanshinone I otopljen u 0,5% CMC primijenjen je oralno 1 sat prije injekcije CGN.Za AIA test, artritična upala je izazvana ubrizgavanjem Mycobacterium lactis (0,6 ml/štakoru) otopljenog u mineralnom ulju u desnu stražnju šapu štakora.Tanshinone sam davao oralno svaki dan.Širenje tretiranih i netretiranih kandži mjereno je pletizmografom.

Reference:[1] Kim SY, et al.Učinci tanshinona I izoliranog iz Salvia miltiorrhiza bunge na metabolizam arahidonske kiseline i in vivo upalne reakcije.Phytother Res.2002 studeni;16(7):616-20.