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Descrizione:tanshinone I è un inibitore sPLA2 ricombinante umano di tipo IIA e cPLA2 ricombinante di coniglio con IC50 rispettivamente di 11 μ M e 82 μ M 。

Categorie Correlate:vie di segnalazione > > enzimi metabolici /
proteasi > > fosfolipidi
Campo di ricerca > > malattie cardiovascolari
Prodotti Naturali > > Chinoni

Obbiettivo:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

Studio in vitro:tanshinone I ha inibito la formazione di PGE2 da macrofagi grezzi indotti da LPS (IC50 = 38 μ M）。 Quando tanshinone I e LPS sono stati aggiunti contemporaneamente, il composto ha inibito significativamente 10-100 μ PGE2 produzione di M (IC50 = 38 μ M ）。 Quando aggiunto dopo la completa induzione di COX-2, il tanshinone I ha anche ridotto la produzione di PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Il fatto che il tanshinone I inibisca la produzione di PGE 2 attraverso la COX-2 preindotta suggerisce fortemente che il composto può inibire direttamente l'attività della COX-2 e / o influenzare l'attività della PLA2. Quando il tanshinone I è stato incubato con due diverse forme di fosfolipasi A2 (PLA2), ha inibito significativamente la sPLA2 in modo dipendente dalla concentrazione (IC50 = 11) μ M). Nonostante il suo basso potenza, tanshinone ho anche inibito cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Studio in vivo:tanshinone I ha mostrato attività antinfiammatoria nell'edema della zampa indotto dalla carragenina e nell'artrite indotta da adiuvante nei ratti.Al fine di stabilire l'attività antinfiammatoria del tanshinone I, sono stati utilizzati modelli animali classici di infiammazione acuta e cronica [edema della zampa indotto da carragenina di ratto (CGN) e artrite indotta da adiuvante di ratto (AIA)].Quando il tanshinone I orale, ha mostrato una significativa attività antinfiammatoria contro l'edema della zampa indotto da CGN (47% di inibizione a 160 mg / kg), mentre l'IC50 dell'indometacina era di 7,1 mg / kg.In AIA, il tanshinone I ha dato il 27% di inibizione dell'infiammazione secondaria il giorno 18 a una dose orale di 50 mg / kg / die, mentre il prednisolone (5 mg / kg / die) ha mostrato un'inibizione efficace (65%) [1]

Esperimento chinasi:come fonte di PLA2, la sPLA2 ricombinante umana (tipo IIA) è stata purificata da cellule CHO trasfettate con il gene PLA2 e la piastrina ricombinante di coniglio cPLA2 è stata ottenuta attraverso la sua espressione nel baculovirus.Miscela di reazione standard (200) μ 50) Conteneva 100 mm di tampone Tris HCl (pH 9,0), 6 mM CaCl2 e 20 nmol di 1-acil - [1-14C] - arachidonil Sn glicerolo fosfato etanolammina (2000 CPM / nmol).Oppure non c'era tanshinone I. la reazione è stata avviata aggiungendo sPLA2 o cPLA2 purificato 50NG.Dopo 20 minuti a 37°C sono stati analizzati gli acidi grassi liberi prodotti.In queste condizioni standard, circa il 10% degli acidi grassi liberi viene rilasciato dal substrato fosfolipidico aggiunto nella miscela di reazione senza tanshinone I [1].

Esperimento cellulare:264,7 cellule grezze sono state coltivate con DMEM integrato con il 10% di FBS e l'1% di antibiotici a 37 ℃ sotto il 5% di CO2.In breve, le cellule sono state seminate su piastre da 96 pozzetti (2) × 10 (5 cellule/pozzetto).Salvo diversa indicazione, sono stati aggiunti LPS (1ug/ml) e tanshinone I e incubati per 24 ore.La concentrazione di PGE2 nel mezzo è stata misurata utilizzando il kit EIA per PGE2.Per determinare l'effetto del tanshinone I sulla produzione di PGE 2 dopo l'induzione di COX-2, le cellule sono state mescolate con LPS (1 μ G / ml) per 24 ore e lavate accuratamente.Quindi, il tanshinone I è stato aggiunto senza LPS e le cellule sono state coltivate per altre 24 ore.La concentrazione di PGE2 è stata misurata dal mezzo.Il test MTT è stato utilizzato per esaminare la citotossicità del tanshinone I sulle cellule grezze.Tanshinone I a 100 μM non ha mostrato alcuna citotossicità [1].

Esperimento sugli animali:al fine di valutare l'attività inibitoria del tanshinone I su modelli animali infiammatori acuti e cronici, sono stati utilizzati modelli di edema della zampa indotto da carragenina di ratto (CGN) e modelli di artrite indotta adiuvante (AIA).In breve, l'1% di CGN disciolto in soluzione fisiologica priva di pirogeni (0,05 ml) è stato iniettato nella zampa posteriore destra dei ratti per il test dell'edema della zampa.Dopo 5 ore, il gonfiore degli artigli trattati è stato misurato utilizzando un pletismografo.Tanshinone I disciolto in CMC allo 0,5% è stato somministrato per via orale 1 ora prima dell'iniezione di CGN.Per il test AIA, l'infiammazione artritica è stata indotta iniettando Mycobacterium lactis (0,6 ml/ratto) disciolto in olio minerale nella zampa posteriore destra dei ratti.Tanshinone mi è stato somministrato per via orale tutti i giorni.L'espansione degli artigli trattati e non trattati è stata misurata utilizzando un pletismografo.

Riferimenti:[1] Kim SY, et al.Effetti del Tanshinone I isolato da Salvia miltiorrhiza bunge sul metabolismo dell'acido arachidonico e sulle risposte infiammatorie in vivo.Phytother ris.2002 novembre;16(7):616-20.