Produkti

Apraksts:tanšinons I ir IIA tipa cilvēka rekombinantais sPLA2 un truša rekombinantais cPLA2 inhibitors ar IC50 attiecīgi 11 μM un 82 μM.

Saistītās kategorijas:signalizācijas ceļi > > vielmaiņas fermenti /
proteāzes > > fosfolipīdi
Pētniecības joma > > sirds un asinsvadu slimības
Dabiski produkti >> Hinoni

Mērķis:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

In vitro pētījums:tanšinons I inhibēja PGE2 veidošanos ar LPS inducētiem neapstrādātiem makrofāgiem (IC50 = 38 μM）。 Ja vienlaikus pievienoja tanšinonu I un LPS, savienojums ievērojami kavēja 10-100 μ PGE2 veidošanos M (IC50 = 38 μM). ）。 Pievienojot pēc pilnīgas COX-2 indukcijas, tanshinons I arī samazināja PGE2 veidošanos (IC50 = 46) μM）。 Fakts, ka tanshinons I inhibē PGE 2 ražošanu, izmantojot iepriekš inducētu COX-2, liecina, ka savienojums var tieši inhibē COX-2 aktivitāti un/vai ietekmē PLA2 aktivitāti. Kad tanšinons I tika inkubēts ar divām dažādām fosfolipāzes A2 formām (PLA2), tas būtiski inhibēja sPLA2 atkarībā no koncentrācijas (IC50 = 11) μM. Neskatoties uz tā zemo līmeni iedarbība, tanšinons I inhibēja arī cPLA2 (IC50 = 82) μM）[1]

In vivo pētījums:tanshinone I uzrādīja pretiekaisuma darbību karagināna izraisītas ķepas tūskas un adjuvantu izraisītas artrīta gadījumā žurkām.Lai noteiktu tanšinona I pretiekaisuma aktivitāti, tika izmantoti klasiski akūtu un hronisku iekaisumu dzīvnieku modeļi [žurku karagināna (CGN) izraisīta ķepu tūska un žurku adjuvanta izraisīts artrīts (AIA)].Iekšķīgi lietojot tanshinonu I, tas uzrādīja ievērojamu pretiekaisuma aktivitāti pret CGN izraisītu ķepu tūsku (47% inhibīcija pie 160 mg/kg), bet indometacīna IC50 bija 7,1 mg/kg.AIA gadījumā tanšinons I 27% inhibēja sekundāro iekaisumu 18. dienā, lietojot perorālu devu 50 mg / kg / dienā, savukārt prednizolons (5 mg / kg / dienā) uzrādīja efektīvu inhibīciju (65%) [1]

Kināzes eksperiments:kā PLA2 avots cilvēka rekombinantais sPLA2 (IIA tips) tika attīrīts no CHO šūnām, kas transficētas ar PLA2 gēnu, un trušu rekombinanto trombocītu cPLA2 ieguva, ekspresējot to bakulovīrusā.Standarta reakcijas maisījums (200) μ 50) Tas saturēja 100 mm Tris HCl buferšķīdumu (pH 9,0), 6 mM CaCl2 un 20 nmol 1-acil - [1-14C] - arahidonil Sn glicerīna fosfāta etanolamīna (2000 CPM / / CPM).Vai arī nebija tanshinona I. reakcija tika sākta, pievienojot 50 NG attīrītu sPLA2 vai cPLA2.Pēc 20 minūtēm 37 ℃ tika analizētas saražotās brīvās taukskābes.Šajos standarta apstākļos aptuveni 10% brīvo taukskābju atbrīvojas no pievienotā fosfolipīdu substrāta reakcijas maisījumā bez tanšinona I [1].

Šūnu eksperiments:neapstrādātas 264.7 šūnas tika kultivētas ar DMEM, kas papildināts ar 10% FBS un 1% antibiotikām 37 ℃ temperatūrā zem 5% CO2.Īsāk sakot, šūnas tika iesētas uz 96 iedobju plāksnēm (2) × 10 (5 šūnas / iedobē).Ja vien nav norādīts citādi, tika pievienots LPS (1 ug/ml) un tanšinons I un inkubēti 24 stundas.PGE2 koncentrācija barotnē tika mērīta, izmantojot PGE2 EIA komplektu.Lai noteiktu tanšinona I ietekmi uz PGE 2 ražošanu pēc COX-2 indukcijas, šūnas 24 stundas sajauca ar LPS (1 μ G / ml) un rūpīgi nomazgāja.Pēc tam tika pievienots tanšinons I bez LPS, un šūnas tika kultivētas vēl 24 stundas.PGE2 koncentrācija tika mērīta no barotnes.MTT tests tika izmantots, lai pārbaudītu tanšinona I citotoksicitāti uz neapstrādātām šūnām.Tanshinone I pie 100 μM neuzrādīja nekādu citotoksicitāti [1].

Eksperiments ar dzīvniekiem:lai novērtētu tanšinona I inhibējošo aktivitāti uz akūtu un hronisku iekaisumu dzīvnieku modeļiem, tika izmantoti žurku karagināna (CGN) izraisītas ķepas tūskas un adjuvantu izraisīta artrīta (AIA) modeļi.Īsāk sakot, 1% CGN, kas izšķīdināts pirogēnu nesaturošā fizioloģiskā šķīdumā (0,05 ml), tika injicēts žurku labajā aizmugurējā ķepā, lai veiktu ķepu tūskas testu.Pēc 5 stundām apstrādāto spīļu pietūkums tika mērīts, izmantojot pletizmogrāfu.Tanshinone I, kas izšķīdināts 0, 5% CMC, tika ievadīts iekšķīgi 1 stundu pirms CGN injekcijas.AIA testam artrīta iekaisumu izraisīja, žurku labajā aizmugurējā ķepā injicējot minerāleļļā izšķīdinātu Mycobacterium lactis (0,6 ml/žurka).Tanshinone man tika ievadīts iekšķīgi katru dienu.Apstrādāto un neapstrādāto spīļu izplešanās tika mērīta, izmantojot pletizmogrāfu.

Atsauces:[1] Kim SY, et al.No Salvia miltiorrhiza bunge izolētā Tanshinone I ietekme uz arahidonskābes metabolismu un in vivo iekaisuma reakcijām.Phytother Res.2002. gada nov.;16(7):616-20.