Producten

Beschrijving:tanshinone I is een type IIA humaan recombinant sPLA2 en Rabbit Recombinant cPLA2-remmer met IC50 van respectievelijk 11 μ M en 82 μ M。

Gerelateerde categorieën:signaalroutes > > metabole enzymen /
proteasen > > fosfolipiden
Onderzoeksveld > > hart- en vaatziekten
Natuurlijke producten > > Chinonen

Doelwit:IC50: 11 M (sPLA2), 82 M (cPLA2) [1].

In vitro-studie:tanshinone I remde de vorming van PGE2 door LPS-geïnduceerde onbewerkte macrofagen (IC50 = 38 M）。 Wanneer tanshinone I en LPS tegelijkertijd werden toegevoegd, remde de verbinding significant 10-100 μ PGE2-productie van M (IC50 = 38 μM) ）。 Wanneer toegevoegd na volledige inductie van COX-2, verminderde tanshinon I ook de productie van PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Het feit dat tanshinone I de productie van PGE 2 remt door vooraf geïnduceerde COX-2 suggereert sterk dat de verbinding kan remt direct de COX-2-activiteit en/of beïnvloedt de PLA2-activiteit. Toen tanshinone I werd geïncubeerd met twee verschillende vormen van fosfolipase A2 (PLA2), remde het sPLA2 significant op een concentratieafhankelijke manier (IC50 = 11) μ M). Ondanks zijn lage potentie, tanshinon Ik remde ook cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

In vivo-studie:tanshinone I vertoonde ontstekingsremmende activiteit bij door carrageen geïnduceerd pootoedeem en door adjuvans geïnduceerde artritis bij ratten.Om de ontstekingsremmende activiteit van tanshinon I vast te stellen, werden klassieke diermodellen van acute en chronische ontsteking [rattencarrageen (CGN)-geïnduceerd pootoedeem en door rattenadjuvans geïnduceerde artritis (AIA)] gebruikt.Bij orale tanshinone I vertoonde het een significante ontstekingsremmende werking tegen CGN-geïnduceerd pootoedeem (47% remming bij 160 mg/kg), terwijl de IC50 van indomethacine 7,1 mg/kg was.Bij AIA gaf tanshinon I 27% remming van secundaire ontsteking op dag 18 bij een orale dosis van 50 mg/kg/dag, terwijl prednisolon (5 mg/kg/dag) effectieve remming vertoonde (65%) [1]

Kinase-experiment:als de bron van PLA2 werd humaan recombinant sPLA2 (type IIA) gezuiverd uit CHO-cellen die waren getransfecteerd met het PLA2-gen, en konijn-recombinante bloedplaatjes cPLA2 werd verkregen door expressie ervan in baculovirus.Standaard reactiemengsel (200) μ 50) Het bevatte 100 mm Tris HCl-buffer (pH 9,0), 6 mM CaCl2 en 20 nmol 1-acyl-[1-14C]-arachidonyl Sn-glycerolfosfaat-ethanolamine (2000 CPM/nmol).Of er was geen tanshinon I. de reactie werd gestart door 50NG gezuiverd sPLA2 of cPLA2 toe te voegen.Na 20 minuten bij 37 werden de geproduceerde vrije vetzuren geanalyseerd.Onder deze standaardomstandigheden komt ongeveer 10% vrije vetzuren vrij uit het toegevoegde fosfolipidesubstraat in het reactiemengsel zonder tanshinon I [1].

Celexperiment:onbewerkte 264,7-cellen werden gekweekt met DMEM aangevuld met 10% FBS en 1% antibiotica bij 37 ℃ onder 5% CO2.Kortom, cellen werden gezaaid op platen met 96 putjes (2) x 106 (5 cellen / putje).Tenzij anders aangegeven, werden LPS (1 ug/ml) en tanshinon I toegevoegd en 24 uur geïncubeerd.De PGE2-concentratie in het medium werd gemeten met behulp van de EIA-kit voor PGE2.Om het effect van tanshinon I op PGE2-productie na COX-2-inductie te bepalen, werden cellen 24 uur gemengd met LPS (1 μG / ml) en grondig gewassen.Vervolgens werd tanshinon I toegevoegd zonder LPS en werden de cellen nog eens 24 uur gekweekt.PGE2-concentratie werd gemeten uit het medium.MTT-assay werd gebruikt om de cytotoxiciteit van tanshinon I op onbewerkte cellen te onderzoeken.Tanshinone I bij 100 M vertoonde geen cytotoxiciteit [1].

Dierexperiment:om de remmende activiteit van tanshinon I op acute en chronische inflammatoire diermodellen te evalueren, werden rat-carrageen (CGN)-geïnduceerd pootoedeem en adjuvans-geïnduceerde artritis (AIA) modellen gebruikt.Kortom, 1% CGN opgelost in pyrogeenvrije zoutoplossing (0,05 ml) werd geïnjecteerd in de rechter achterpoot van ratten voor pootoedeemtest.Na 5 uur werd de zwelling van de behandelde klauwen gemeten met een plethysmograaf.Tanshinone I opgelost in 0,5% CMC werd oraal toegediend 1 uur vóór CGN-injectie.Voor de AIA-test werd artritische ontsteking geïnduceerd door Mycobacterium lactis (0,6 ml / rat) opgelost in minerale olie in de rechter achterpoot van ratten te injecteren.Tanshinone Ik kreeg elke dag oraal toegediend.De uitzetting van behandelde en onbehandelde klauwen werd gemeten met een plethysmograaf.

Referenties:[1] Kim SY, et al.Effecten van Tanshinone I geïsoleerd uit Salvia miltiorrhiza bunge op het arachidonzuurmetabolisme en in vivo ontstekingsreacties.Phytother Res.2002 nov;16(7):616-20.