Produkter

Beskrivelse:tanshinon I er en type IIA human rekombinant sPLA2 og kanin rekombinant cPLA2 hemmer med IC50 på henholdsvis 11 μM og 82 μM.

Relaterte kategorier:signalveier > > metabolske enzymer /
proteaser > > fosfolipider
Forskningsfelt >> hjerte- og karsykdommer
Naturlige produkter > > Kinoner

Mål:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

In vitro-studie:tanshinon I hemmet dannelsen av PGE2 av LPS-induserte rå makrofager (IC50 = 38 μ M）。 Når tanshinon I og LPS ble tilsatt samtidig, hemmet forbindelsen signifikant 10-100 μ PGE2-produksjon av M (IC50 = 38 μM) ）。 Ved tilsetning etter fullstendig induksjon av COX-2, reduserte tanshinon I også produksjonen av PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Det faktum at tanshinon I hemmer PGE 2-produksjon gjennom pre-indusert COX-2 tyder sterkt på at forbindelsen kan direkte hemme COX-2-aktivitet og/eller påvirke PLA2-aktivitet. Når tanshinon I ble inkubert med to forskjellige former for fosfolipase A2 (PLA2), hemmet det sPLA2 betydelig på en konsentrasjonsavhengig måte (IC50 = 11) μM). Til tross for dens lave potens, tanshinon I hemmet også cPLA2 (IC50 = 82) μM）[1]

In vivo-studie:tanshinon I viste anti-inflammatorisk aktivitet i karragenanindusert poteødem og adjuvansindusert leddgikt hos rotter.For å etablere den antiinflammatoriske aktiviteten til tanshinon I, ble klassiske dyremodeller av akutt og kronisk betennelse [rottekarragenan (CGN)-indusert poteødem og rotteadjuvansindusert artritt (AIA)] brukt.Ved oral tanshinon I viste det signifikant anti-inflammatorisk aktivitet mot CGN-indusert poteødem (47 % hemming ved 160 mg/kg), mens IC50 for indometacin var 7,1 mg/kg.Ved AIA ga tanshinon I 27 % hemming av sekundær betennelse på dag 18 ved en oral dose på 50 mg/kg/dag, mens prednisolon (5 mg/kg/dag) viste effektiv hemming (65%) [1]

Kinase-eksperiment:som kilde til PLA2 ble human rekombinant sPLA2 (type IIA) renset fra CHO-celler transfektert med PLA2-gen, og kanin rekombinant blodplate cPLA2 ble oppnådd gjennom dets ekspresjon i baculovirus.Standard reaksjonsblanding (200) μ 50) Den inneholdt 100 mm Tris HCl-buffer (pH 9,0), 6 mM CaCl2 og 20 nmol 1-acyl - [1-14C] - arachidonyl Sn glyserolfosfatetanolamin (2000 CPM / nmol).Eller det var ingen tanshinon I. reaksjonen ble startet ved å tilsette 50NG renset sPLA2 eller cPLA2.Etter 20 minutter ved 37 ℃ ble de frie fettsyrene som ble produsert analysert.Under disse standardbetingelsene frigjøres ca. 10 % av frie fettsyrer fra det tilsatte fosfolipidsubstratet i reaksjonsblandingen uten tanshinon I [1].

Celleeksperiment:rå 264,7 celler ble dyrket med DMEM supplert med 10 % FBS og 1 % antibiotika ved 37 ℃ under 5 % CO2.Kort sagt, celler ble sådd på 96-brønners plater (2) × 10 (5 celler / brønn).Med mindre annet er angitt, ble LPS (1 ug/ml) og tanshinon I tilsatt og inkubert i 24 timer.PGE2-konsentrasjonen i mediet ble målt ved å bruke EIA-settet for PGE2.For å bestemme effekten av tanshinon I på PGE 2-produksjonen etter COX-2-induksjon, ble cellene blandet med LPS (1 μ G / ml) i 24 timer og vasket grundig.Deretter ble tanshinon I tilsatt uten LPS og cellene ble dyrket i ytterligere 24 timer.PGE2-konsentrasjonen ble målt fra mediet.MTT-analyse ble brukt for å undersøke cytotoksisiteten til tanshinon I på rå celler.Tanshinon I ved 100 μM viste ingen cytotoksisitet [1].

Dyreforsøk:for å evaluere den hemmende aktiviteten til tanshinon I på akutte og kroniske inflammatoriske dyremodeller, ble rottekarragenan (CGN)-indusert poteødem og adjuvansindusert artritt (AIA)-modeller brukt.Kort fortalt ble 1 % CGN oppløst i pyrogenfritt saltvann (0,05 ml) injisert i høyre bakpote på rotter for poteødemtest.Etter 5 timer ble hevelsen av de behandlede klørne målt ved bruk av en pletysmograf.Tanshinon I oppløst i 0,5 % CMC ble administrert oralt 1 time før CGN-injeksjon.For AIA-testen ble artrittbetennelse indusert ved å injisere Mycobacterium lactis (0,6 ml / rotte) oppløst i mineralolje i høyre bakpote på rotter.Tanshinone Jeg ble administrert oralt hver dag.Utvidelsen av behandlede og ubehandlede klør ble målt ved hjelp av en pletysmograf.

Referanser:[1] Kim SY, et al.Effekter av Tanshinone I isolert fra Salvia miltiorrhiza bunge på arakidonsyremetabolisme og in vivo inflammatoriske responser.Phytother Res.2002 nov;16(7):616-20.