Produkty

Opis:tanszynon I jest ludzkim rekombinowanym inhibitorem sPLA2 i królika rekombinowanego cPLA2 typu IIA o IC50 odpowiednio 11 μM i 82 μM。

Powiązane kategorie:szlaki sygnałowe > > enzymy metaboliczne /
proteazy > > fosfolipidy
Dziedzina badań > > choroba sercowo-naczyniowa
Produkty naturalne > > Chinony

Cel:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2) [1].

Badanie in vitro:tanszynon I hamował tworzenie PGE2 przez surowe makrofagi indukowane LPS (IC50 = 38 μM）。 Gdy tanszynon I i LPS były dodawane w tym samym czasie, związek znacząco hamował wytwarzanie M 10-100 μ PGE2 (IC50 = 38 μM ）。 Dodany po całkowitej indukcji COX-2, tanszynon I zmniejszył również produkcję PGE2 (IC50 = 46) μM）。 Fakt, że tanszynon I hamuje produkcję PGE 2 przez preindukowaną COX-2 silnie sugeruje, że związek może bezpośrednio hamują aktywność COX-2 i/lub wpływają na aktywność PLA 2. Kiedy tanszynon I był inkubowany z dwiema różnymi formami fosfolipazy A2 (PLA2), znacząco hamował sPLA2 w sposób zależny od stężenia (IC50 = 11) μM). siła działania, tanszynon I również hamował cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Badanie in vivo:tanszynon I wykazywał działanie przeciwzapalne w obrzęku łap wywołanym karageniną i zapaleniu stawów wywołanym adiuwantem u szczurów.W celu ustalenia działania przeciwzapalnego tanszynonu I zastosowano klasyczne zwierzęce modele ostrego i przewlekłego zapalenia [obrzęk łap wywołany karageniną szczura (CGN) i zapalenie stawów wywołane adiuwantem szczura (AIA)].Po podaniu doustnym tanszynon I wykazywał znaczące działanie przeciwzapalne przeciwko wywołanemu przez CGN obrzękowi łapy (47% inhibicji przy 160 mg/kg), podczas gdy IC50 indometacyny wynosiło 7,1 mg/kg.W AIA tanszynon I dał 27% zahamowanie wtórnego zapalenia w 18. dobie w dawce doustnej 50 mg/kg/dzień, natomiast prednizolon (5 mg/kg/dzień) wykazał skuteczne hamowanie (65%) [1]

Eksperyment z kinazą:jako źródło PLA2, ludzkie zrekombinowane sPLA2 (typu IIA) oczyszczono z komórek CHO transfekowanych genem PLA2, a królicze zrekombinowane płytki krwi cPLA2 otrzymano poprzez jego ekspresję w bakulowirusie.Standardowa mieszanina reakcyjna (200) μ 50) Zawierała 100 mm bufor Tris HCl (pH 9,0), 6 mM CaCl2 i 20 nmol 1-acylo-[14C]-arachidonylo-glicerolu fosforan etanoloaminy (2000 CPM/nmol).Lub nie było tanzynonu I. reakcję rozpoczęto przez dodanie 50NG oczyszczonego sPLA2 lub cPLA2.Po 20 minutach w 37°C analizowano wytworzone wolne kwasy tłuszczowe.W tych standardowych warunkach około 10% wolnych kwasów tłuszczowych jest uwalnianych z dodanego substratu fosfolipidowego w mieszaninie reakcyjnej bez tanszynonu I [1].

Eksperyment komórkowy:surowe 264,7 komórki hodowano z DMEM uzupełnionym 10% FBS i 1% antybiotykami w 37 ℃ i 5% CO2.W skrócie, komórki wysiano na 96-studzienkowych płytkach (2) x 10 (5 komórek/studzienkę).O ile nie wskazano inaczej, dodano LPS (1 ug/ml) i tanszynon I i inkubowano przez 24 godziny.Stężenie PGE2 w pożywce mierzono za pomocą zestawu EIA dla PGE2.W celu określenia wpływu tanszynonu I na wytwarzanie PGE2 po indukcji COX-2, komórki mieszano z LPS (1 μG/ml) przez 24 godziny i dokładnie płukano.Następnie dodano tanszynon I bez LPS i komórki hodowano przez kolejne 24 godziny.Stężenie PGE2 mierzono z pożywki.Test MTT zastosowano do zbadania cytotoksyczności tanszynonu I na surowych komórkach.Tanszynon I w stężeniu 100 μM nie wykazywał cytotoksyczności [1].

Eksperyment na zwierzętach:W celu oceny aktywności hamującej tanzynonu I na zwierzęcych modelach ostrego i przewlekłego stanu zapalnego zastosowano modele obrzęku łap wywołanego karageniną szczura (CGN) i zapalenia stawów wywołanego adiuwantem (AIA).W skrócie, 1% CGN rozpuszczony w soli fizjologicznej wolnej od pirogenów (0,05 ml) wstrzyknięto do prawej tylnej łapy szczurów do testu obrzęku łapy.Po 5 godzinach obrzęk leczonych pazurów mierzono pletyzmografem.Tanszynon I rozpuszczony w 0,5% CMC podawano doustnie 1 godzinę przed wstrzyknięciem CGN.W teście AIA zapalenie stawów wywołano przez wstrzyknięcie Mycobacterium lactis (0,6 ml/szczur) rozpuszczonego w oleju mineralnym w prawą tylną łapę szczurów.Tanshinon podawano mi codziennie doustnie.Ekspansję pazurów traktowanych i nietraktowanych mierzono za pomocą pletyzmografu.

Bibliografia:[1] Kim SY i in.Wpływ Tanshinon I wyizolowanego z bunge Salvia miltiorrhiza na metabolizm kwasu arachidonowego i reakcje zapalne in vivo.Phytother Res.2002 listopad;16(7):616-20.