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Descrição:tanshinone I é um tipo IIA recombinante humano sPLA2 e inibidor de cPLA2 recombinante de coelho com IC50 de 11 respectivamente μ M e 82 μ M。

Categorias relacionadas:vias de sinalização > > enzimas metabólicas /
proteases > > fosfolipídios
Área de pesquisa > > doenças cardiovasculares
Produtos Naturais > > Quinonas

Alvo:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

Estudo in vitro:tanshinone I inibiu a formação de PGE2 por macrófagos brutos induzidos por LPS (IC50 = 38 μ M）。 Quando tanshinone I e LPS foram adicionados ao mesmo tempo, o composto inibiu significativamente a produção de 10-100 μ PGE2 de M (IC50 = 38 μ M ）。 Quando adicionado após a indução completa de COX-2, tanshinone I também reduziu a produção de PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 O fato de que tanshinone I inibe a produção de PGE 2 através de COX-2 pré-induzida sugere fortemente que o composto pode inibem diretamente a atividade da COX-2 e/ou afetam a atividade da PLA2. Quando a tansinona I foi incubada com duas formas diferentes de fosfolipase A2 (PLA2), inibiu significativamente a sPLA2 de maneira dependente da concentração (IC50 = 11) μM). Apesar de sua baixa potência, tanshinone I também inibiu cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Estudo In Vivo:tanshinone I mostrou atividade anti-inflamatória no edema de pata induzido por carragenina e artrite induzida por adjuvante em ratos.Para estabelecer a atividade anti-inflamatória da tansinona I, foram utilizados modelos animais clássicos de inflamação aguda e crônica [edema de pata induzido por carragenina de rato (CGN) e artrite induzida por adjuvante de rato (AIA)].Quando a tansinona I oral, apresentou atividade anti-inflamatória significativa contra o edema de pata induzido por CGN (47% de inibição a 160 mg/kg), enquanto a IC50 da indometacina foi de 7,1 mg/kg.Na AIA, a tanshinona I deu 27% de inibição da inflamação secundária no dia 18 na dose oral de 50 mg/kg/dia, enquanto a prednisolona (5 mg/kg/dia) apresentou inibição efetiva (65%) [1]

Experiência de quinase:como fonte de PLA2, sPLA2 recombinante humana (tipo IIA) foi purificada a partir de células CHO transfectadas com o gene PLA2, e a cPLA2 de plaquetas recombinantes de coelho foi obtida através de sua expressão em baculovírus.Mistura de reação padrão (200) μ 50) Continha 100 mm de tampão Tris HCl (pH 9,0), 6 mM CaCl2 e 20 nmol de 1-acil-[1-14C]-araquidonil Sn glicerol fosfato etanolamina (2000 CPM / nmol).Ou não havia tansinona I. a reação foi iniciada pela adição de 50NG de sPLA2 ou cPLA2 purificada.Após 20 minutos a 37 ℃, os ácidos graxos livres produzidos foram analisados.Sob essas condições padrão, cerca de 10% dos ácidos graxos livres são liberados do substrato fosfolipídico adicionado na mistura de reação sem tansinona I [1].

Experiência de célula:células 264,7 brutas foram cultivadas com DMEM suplementado com 10% de FBS e 1% de antibióticos a 37 ℃ sob 5% de CO2.Em resumo, as células foram semeadas em placas de 96 poços (2) × 10 (5 células/poço).Salvo indicação em contrário, LPS (1ug/ml) e tanshinone I foram adicionados e incubados por 24 horas.A concentração de PGE2 no meio foi medida usando o kit EIA para PGE2.Para determinar o efeito da tanshinona I na produção de PGE 2 após a indução de COX-2, as células foram misturadas com LPS (1 μ G/ml) por 24 horas e lavadas cuidadosamente.Em seguida, adicionou-se tanshinone I sem LPS e as células foram cultivadas por mais 24 horas.A concentração de PGE2 foi medida a partir do meio.O ensaio MTT foi usado para examinar a citotoxicidade da tansinona I em células brutas.Tanshinone I a 100 μM não mostrou qualquer citotoxicidade [1].

Experiência com Animais:para avaliar a atividade inibitória da tansinona I em modelos animais inflamatórios agudos e crônicos, foram utilizados modelos de edema de pata induzido por carragenina (CGN) e artrite induzida por adjuvante (AIA).Em resumo, 1% de CGN dissolvido em solução salina livre de pirogênio (0,05 ml) foi injetado na pata traseira direita de ratos para teste de edema de pata.Após 5 horas, o inchaço das garras tratadas foi medido usando um pletismógrafo.A tanshinona I dissolvida em CMC a 0,5% foi administrada oralmente 1 hora antes da injeção de CGN.Para o teste de AIA, a inflamação artrítica foi induzida pela injeção de Mycobacterium lactis (0,6ml/rato) dissolvido em óleo mineral na pata traseira direita de ratos.Tanshinone I foi administrado por via oral todos os dias.A expansão das garras tratadas e não tratadas foi medida usando um pletismógrafo.

Referências:[1] Kim SY, et al.Efeitos de Tanshinone I isolado de Salvia miltiorrhiza bunge no metabolismo do ácido araquidônico e respostas inflamatórias in vivo.Phytother Res.2002 novembro;16(7):616-20.