Produkty

Popis:tanshinón I je ľudský rekombinantný inhibítor sPLA2 a králičieho rekombinantného cPLA2 typu IIA s IC50 11 μM a 82 μM.

Súvisiace kategórie:signálne dráhy > > metabolické enzýmy /
proteázy > > fosfolipidy
Oblasť výskumu >> kardiovaskulárne ochorenia
Prírodné produkty > > Chinony

Cieľ:IC50: 11 uM (sPLA2), 82 uM (cPLA2)[1].

Štúdia in vitro:tanshinón I inhiboval tvorbu PGE2 surovými makrofágmi indukovanými LPS (IC50 = 38 μM）。 Keď sa tanshinón I a LPS pridali súčasne, zlúčenina významne inhibovala 10-100 μ PGE2 produkciu M (IC50 = 38 μM ）。 Keď sa tanshinón I pridal po úplnej indukcii COX-2, znížil aj produkciu PGE2 (IC50 = 46) μM）。 Skutočnosť, že tanshinón I inhibuje produkciu PGE 2 prostredníctvom vopred indukovanej COX-2, silne naznačuje, že zlúčenina môže priamo inhibuje aktivitu COX-2 a/alebo ovplyvňuje aktivitu PLA2. Keď bol tanshinón I inkubovaný s dvoma rôznymi formami fosfolipázy A2 (PLA2), významne inhiboval sPLA2 spôsobom závislým od koncentrácie (IC50 = 11) μM. účinnosť, tanshinón I tiež inhiboval cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Štúdia in vivo:tanshinon I vykazoval protizápalovú aktivitu pri edéme labky vyvolanom karagénanom a artritíde vyvolanej adjuvans u potkanov.Na stanovenie protizápalovej aktivity tanshinónu I sa použili klasické zvieracie modely akútneho a chronického zápalu [edém labky vyvolaný karagénanom (CGN) a artritída vyvolaná potkaním adjuvans (AIA)].Pri perorálnom podaní tanshinónu I vykazoval významnú protizápalovú aktivitu proti edému labky vyvolanému CGN (47 % inhibícia pri 160 mg/kg), zatiaľ čo IC50 indometacínu bola 7,1 mg/kg.Pri AIA tanshinón I poskytol 27 % inhibíciu sekundárneho zápalu na 18. deň pri perorálnej dávke 50 mg/kg/deň, zatiaľ čo prednizolón (5 mg/kg/deň) vykazoval účinnú inhibíciu (65 %) [1]

Experiment s kinázou:ako zdroj PLA2 bola humánna rekombinantná sPLA2 (typ IIA) purifikovaná z CHO buniek transfekovaných PLA2 génom a králičia rekombinantná doštičková cPLA2 bola získaná prostredníctvom jej expresie v bakulovíruse.Štandardná reakčná zmes (200) μ 50) Obsahovala 100 mm Tris HCl pufra (pH 9,0), 6 mM CaCl2 a 20 nmol 1-acyl-[1-14C]-arachidonyl Sn glycerolfosfát etanolamínu (2000 CPM/nmol).Alebo tam nebol žiadny tanshinón I. Reakcia sa začala pridaním 50 NG purifikovaného sPLA2 alebo cPLA2.Po 20 minútach pri 37 °C sa analyzovali vytvorené voľné mastné kyseliny.Za týchto štandardných podmienok sa z pridaného fosfolipidového substrátu v reakčnej zmesi bez tanshinónu I uvoľní asi 10 % voľných mastných kyselín [1].

Experiment s bunkou:surové bunky 264.7 sa kultivovali s DMEM doplneným 10 % FBS a 1 % antibiotikami pri 37 °C pod 5 % C02.Stručne povedané, bunky sa naočkovali na 96-jamkové platne (2) x 10 (5 buniek/jamka).Pokiaľ nie je uvedené inak, pridali sa LPS (1 ug/ml) a tanshinón I a inkubovali sa 24 hodín.Koncentrácia PGE2 v médiu sa merala pomocou súpravy EIA pre PGE2.Aby sa určil účinok tanshinónu I na produkciu PGE2 po indukcii COX-2, bunky sa zmiešali s LPS (1 μG / ml) počas 24 hodín a dôkladne sa premyli.Potom sa pridal tanshinón I bez LPS a bunky sa kultivovali ďalších 24 hodín.Koncentrácia PGE2 sa merala z média.MTT test sa použil na skúmanie cytotoxicity tanshinónu I na surové bunky.Tanshinón I pri 100 μM nevykazoval žiadnu cytotoxicitu [1].

Pokus na zvieratách:na vyhodnotenie inhibičnej aktivity tanshinónu I na zvieracích modeloch s akútnym a chronickým zápalom sa použili modely potkanieho edému labky vyvolaného karagénanom (CGN) a artritídy vyvolanej adjuvans (AIA).Stručne povedané, 1% CGN rozpustený v apyrogénnom fyziologickom roztoku (0,05 ml) bol injikovaný do pravej zadnej labky potkanov na test edému labky.Po 5 hodinách sa zmeral opuch liečených pazúrov pomocou pletyzmografu.Tanshinón I rozpustený v 0,5 % CMC sa podával perorálne 1 hodinu pred injekciou CGN.Pre AIA test bol artritický zápal vyvolaný injekciou Mycobacterium lactis (0,6 ml/potkan) rozpusteného v minerálnom oleji do pravej zadnej labky potkanov.Tanshinone I bol podávaný perorálne každý deň.Rozšírenie ošetrených a neošetrených pazúrov sa meralo pomocou pletyzmografu.

Referencie:[1] Kim SY, a kol.Účinky Tanshinonu I izolovaného zo Salvia miltiorrhiza bunge na metabolizmus kyseliny arachidónovej a in vivo zápalové reakcie.Phytother Res.november 2002;16(7):616-20.