Izdelki

Opis:tanšinon I je človeški rekombinantni zaviralec sPLA2 tipa IIA in zajčji rekombinantni zaviralec cPLA2 z IC50 11 μM oziroma 82 μM.

Sorodne kategorije:signalne poti > > presnovni encimi /
proteaze > > fosfolipidi
Raziskovalno področje > > bolezni srca in ožilja
Naravni izdelki >> Kinoni

Cilj:IC50: 11 μM (sPLA2), 82 μM (cPLA2)[1].

Študija in vitro:tanšinon I je zaviral tvorbo PGE2 s surovimi makrofagi, induciranimi z LPS (IC50 = 38 μM）。 Ko sta bila tanšinon I in LPS dodana istočasno, je spojina znatno zavirala 10-100 μ PGE2 proizvodnjo M (IC50 = 38 μM). ）。 Ko je bil tanšinon I dodan po popolni indukciji COX-2, je tudi zmanjšal nastajanje PGE2 (IC50 = 46) μ M）。 Dejstvo, da tanšinon I zavira nastajanje PGE 2 prek vnaprej induciranega COX-2, močno nakazuje, da lahko spojina neposredno zavira aktivnost COX-2 in/ali vpliva na aktivnost PLA2. Ko je bil tanšinon I inkubiran z dvema različnima oblikama fosfolipaze A2 (PLA2), je znatno zaviral sPLA2 na način, odvisen od koncentracije (IC50 = 11) μ M). moč, tanšinon I je zaviral tudi cPLA2 (IC50 = 82) μ M）[1]

Študija in vivo:tanshinone I je pokazal protivnetno delovanje pri edemu šape, ki ga je povzročil karagenan, in artritisu, ki ga je povzročil adjuvans pri podganah.Da bi ugotovili protivnetno delovanje tanšinona I, so uporabili klasične živalske modele akutnega in kroničnega vnetja [podganji karagenan (CGN) - povzročen edem šape in podganji adjuvans povzročen artritis (AIA)].Pri peroralnem dajanju tanšinona I je pokazal znatno protivnetno delovanje proti edemu šape, ki ga povzroča CGN (47-odstotna inhibicija pri 160 mg/kg), medtem ko je IC50 indometacina znašal 7,1 mg/kg.Pri AIA je tanšinon I 18. dan pri peroralnem odmerku 50 mg/kg/dan povzročil 27-odstotno inhibicijo sekundarnega vnetja, medtem ko je prednizolon (5 mg/kg/dan) pokazal učinkovito inhibicijo (65 %) [1]

Poskus s kinazo:kot vir PLA2 je bil človeški rekombinantni sPLA2 (tip IIA) prečiščen iz celic CHO, transficiranih z genom PLA2, in zajčji rekombinantni trombocitni cPLA2 je bil pridobljen z njegovo ekspresijo v bakulovirusu.Standardna reakcijska zmes (200) μ 50) Vsebovala je 100 mm Tris HCl pufra (pH 9,0), 6 mM CaCl2 in 20 nmol 1-acil - [1-14C] - arahidonil Sn glicerol fosfat etanolamina (2000 CPM / nmol).Ali ni bilo tanšinona I. Reakcija se je začela z dodajanjem 50 NG prečiščenega sPLA2 ali cPLA2.Po 20 minutah pri 37 ℃ smo analizirali proizvedene proste maščobne kisline.Pri teh standardnih pogojih se iz dodanega fosfolipidnega substrata v reakcijski mešanici brez tanšinona I sprosti približno 10 % prostih maščobnih kislin [1].

Celični poskus:neobdelane celice 264.7 smo gojili z DMEM, dopolnjenim z 10 % FBS in 1 % antibiotikov pri 37 ℃ pod 5 % CO2.Skratka, celice so bile posejane na plošče s 96 jamicami (2) × 10 (5 celic/jamico).Če ni navedeno drugače, smo dodali LPS (1 ug / ml) in tanšinon I in ju inkubirali 24 ur.Koncentracijo PGE2 v mediju smo izmerili s kompletom EIA za PGE2.Da bi določili učinek tanšinona I na proizvodnjo PGE 2 po indukciji COX-2, smo celice mešali z LPS (1 μ G / ml) 24 ur in jih temeljito sprali.Nato smo dodali tanšinon I brez LPS in celice gojili še 24 ur.Koncentracijo PGE2 smo izmerili iz medija.Test MTT je bil uporabljen za preučevanje citotoksičnosti tanšinona I na surovih celicah.Tanshinone I pri 100 µM ni pokazal nobene citotoksičnosti [1].

Poskusi na živalih:da bi ovrednotili inhibitorno aktivnost tanšinona I na akutnih in kroničnih vnetnih živalskih modelih, so uporabili modele edema šape, povzročenega s karagenanom (CGN), in artritisa, povzročenega z adjuvantom (AIA).Skratka, 1 % CGN, raztopljenega v apirogenski fiziološki raztopini (0,05 ml), je bil injiciran v desno zadnjo šapo podgan za test edema šape.Po 5 urah smo s pletizmografom izmerili oteklino tretiranih krempljev.Tanshinone I, raztopljen v 0,5 % CMC, so dajali peroralno 1 uro pred injiciranjem CGN.Za test AIA je bilo artritično vnetje inducirano z injiciranjem Mycobacterium lactis (0,6 ml / podgano), raztopljenega v mineralnem olju, v desno zadnjo šapo podgan.Tanshinone sem dobival peroralno vsak dan.Razširjenost tretiranih in netretiranih krempljev smo merili s pletizmografom.

Reference:[1] Kim SY, et al.Učinki tanšinona I, izoliranega iz Salvia miltiorrhiza bunge, na presnovo arahidonske kisline in in vivo vnetne odzive.Phytother Res.2002 nov;16(7):616-20.