Продукти

опис:таншинон I є рекомбінантним інгібітором sPLA2 людини типу IIA та кролячого рекомбінантного cPLA2 з IC50 відповідно 11 мкМ і 82 мкМ.

Пов'язані категорії:сигнальні шляхи > > метаболічні ферменти /
протеази > > фосфоліпіди
Область досліджень > > серцево-судинні захворювання
Натуральні продукти > > Хінони

Мета:IC50: 11 мкМ (sPLA2), 82 мкМ (cPLA2)[1].

Дослідження in vitro:таншинон I інгібував утворення PGE2 необробленими макрофагами, індукованими ЛПС (IC50 = 38 мкМ). Коли таншинон I і ЛПС додавали одночасно, сполука значно інгібувала 10-100 мкм PGE2 продукування М (IC50 = 38 мкМ). ）。 При додаванні після повної індукції ЦОГ-2 таншинон I також знижував виробництво PGE2 (IC50 = 46) мкМ）。 Той факт, що таншинон I пригнічує виробництво PGE 2 через попередньо індуковану ЦОГ-2, переконливо свідчить про те, що сполука може безпосередньо інгібують активність ЦОГ-2 та/або впливають на активність PLA2. Коли таншинон I інкубували з двома різними формами фосфоліпази A2 (PLA2), він значно інгібував sPLA2 залежно від концентрації (IC50 = 11) мкМ). потенції, таншинон I також інгібував cPLA2 (IC50 = 82) мкМ）[1]

Дослідження in vivo:таншинон I продемонстрував протизапальну активність при набряку лапи, викликаному карагенаном, і артриті, викликаному ад'ювантом, у щурів.Щоб встановити протизапальну активність таншинону I, використовували класичні тваринні моделі гострого та хронічного запалення [набряк лапи, спричинений карагенаном щурів (CGN) та артрит, індукований ад’ювантом щурів (AIA)].При пероральному прийомі таншинону I він продемонстрував значну протизапальну активність проти набряку лапи, спричиненого CGN (47% інгібування при дозі 160 мг/кг), тоді як IC50 індометацину становила 7,1 мг/кг.У AIA таншинон I дав 27% інгібування вторинного запалення на 18 день при пероральному прийомі 50 мг/кг/день, тоді як преднізолон (5 мг/кг/день) продемонстрував ефективне інгібування (65%) [1]

Експеримент з кіназою:як джерело PLA2, людський рекомбінантний sPLA2 (тип IIA) був очищений з клітин CHO, трансфікованих геном PLA2, і кролячий рекомбінантний тромбоцитарний cPLA2 був отриманий шляхом його експресії в бакуловірусі.Стандартна реакційна суміш (200) µ 50) Вона містила 100 мМ Tris HCl буфер (рН 9,0), 6 мМ CaCl2 і 20 нмоль 1-ацил - [1-14C] - арахідоніл Sn гліцеролфосфат етаноламін (2000 CPM / нмоль).Або не було таншинону I. Реакцію починали додаванням 50 нг очищеного sPLA2 або cPLA2.Через 20 хвилин при 37 ℃ аналізували утворені вільні жирні кислоти.За цих стандартних умов близько 10% вільних жирних кислот вивільняється з доданого фосфоліпідного субстрату в реакційну суміш без таншинону I [1].

Клітинний експеримент:необроблені клітини 264.7 культивували з DMEM з додаванням 10% FBS і 1% антибіотиків при 37 ℃ під 5% CO2.Коротше кажучи, клітини висівали на 96-лункові планшети (2) × 10 (5 клітин на лунку).Якщо не вказано інше, LPS (1 мкг/мл) і таншинон I додавали та інкубували протягом 24 годин.Концентрацію PGE2 у середовищі вимірювали за допомогою набору EIA для PGE2.Щоб визначити вплив таншинону I на продукцію PGE 2 після індукції ЦОГ-2, клітини змішували з ЛПС (1 мкг/мл) протягом 24 годин і ретельно промивали.Потім додавали таншинон I без ЛПС і клітини культивували ще 24 години.Концентрацію PGE2 вимірювали в середовищі.Для дослідження цитотоксичності таншинону I на необроблених клітинах використовували аналіз MTT.Таншинон I при 100 мкМ не виявляв жодної цитотоксичності [1].

Експеримент на тваринах:щоб оцінити інгібіторну активність таншинону I на гострих і хронічних запальних моделях на тваринах, використовували моделі набряку лапи, індукованого карагенаном щурів (CGN) та артриту, індукованого ад’ювантом (AIA).Коротше кажучи, 1% CGN, розчинений у апірогенному фізіологічному розчині (0,05 мл), вводили в праву задню лапу щурів для тесту на набряк лапи.Через 5 годин за допомогою плетизмографа вимірювали набряк оброблених кігтів.Таншинон I, розчинений у 0,5% CMC, застосовували перорально за 1 годину до ін’єкції CGN.Для тесту AIA артритне запалення викликали ін’єкцією Mycobacterium lactis (0,6 мл/щура), розчиненого в мінеральній олії, у праву задню лапу щурів.Таншинон мені призначали всередину кожен день.Розширення оброблених і необроблених кігтів вимірювали за допомогою плетизмографа.

Література:[1] Kim SY та ін.Вплив таншинону I, виділеного з Salvia miltiorrhiza bunge, на метаболізм арахідонової кислоти та запальні реакції in vivo.Phytother Res.2002 листопад;16(7):616-20.